Новое о вирусном параличе

Вирусный паралич — сезонное заболевание взрослых пчел, протекает с мая по сентябрь. Максимум развития падает на первую и вторую декаду июня. Начало заболевания клинически выражается в появлении на земле около ульев множества медленно и вяло двигающихся пчел, покрывающих всю территорию точка. Способность к полету у заболевших пчел снижена или полностью утрачена. Они ползают перед летками, стараются забраться на стебли растений. В больных семьях здоровые пчелы постоянно выбрасывают заболевшиВирусный паралич — сезонное заболевание взрослых пчел, протекает с мая по сентябрь. Максимум развития падает на первую и вторую декаду июня. Начало заболевания клинически выражается в появлении на земле около ульев множества медленно и вяло двигающихся пчел, покрывающих всю территорию точка. Способность к полету у заболевших пчел снижена или полностью утрачена. Они ползают перед летками, стараются забраться на стебли растений. В больных семьях здоровые пчелы постоянно выбрасывают заболевших.х.

Вирусный паралич — сезонное заболевание взрослых пчел, протекает с мая по сентябрь. Максимум развития падает на первую и вторую декаду июня. Начало заболевания клинически выражается в появлении на земле около ульев множества медленно и вяло двигающихся пчел, покрывающих всю территорию точка. Способность к полету у заболевших пчел снижена или полностью утрачена. Они ползают перед летками, стараются забраться на стебли растений. В больных семьях здоровые пчелы постоянно выбрасывают заболевших.

Некоторые пчелы страдают раскрылицей, у них нарушена координация движений. Помещенные на руку и постоянно раздражаемые насекомые остаются малоподвижными, не способными к ужалению. Такое состояние мы назвали стадией парезов Оно наступает на пятые-шестые сутки после заражения. Часть этих пчел теряет волоски с хитина. Грудь й брюшко приобретают угольно-черный, блестящий цвет.

На 9—11 сутки после заболевания число вялых, ползающих пчел возрастает Стадия пареза переходит В состояние прогрессирующего паралича Пчелы Полностью теряют способность восстанавливать равновесие своего тела. Иногда отмечаются судорожные сокращения тела, крыльев конечностей.

При дифференциальнои диагностике на вирусный паралич необходимо исключить заболевания со сходными клиническими признаками — токсикозы, бактериальные заболевания взрослых пчел. Для этого от каждой семьи, подозреваемой в заболевании вирусным параличом, необходимо отобрать не менее пяти живых пчел и зафиксировать их в 50 °0 ном растворе глицерина на фосфатном буфере Такие пробы с сопроводительным письмом отправляют в ветеринарнье лаборатории для диагностики вирусного паралича пчел.

Диагностика. Высокая чувствительность и специфичность иммунофлюоресценции, сравнительная простота и быстрое получение результатов позволяют использовать ее как метод экспресс-диагностики вирусного паралича пчел

У исследуемых пчел изолируют кишечник и фиксируют его в смеси Карнуа (абсолютный спирт — шесть частей, хлороформ — три части, ледяная уксусная кислота — одна часть) 30 мин. Ткань заливают парафином и делают срезы, применяя обычные гистологические приемы Антиген готовят следующим образом. Пчел помещают в стерильную ступку с фосфатным буфером или физиологическим раствором (рН 7 2— 7,4), исходя из расчета 1 мл жидкости на 1 пчелу. С помощью мелко истолченного стекла пчел растирают до однородной массы, после чего переносят в пенициллиновые флаконы и центрифугируют в течение 15 мин. при 6000 об/мин. Надо-садочную жидкость фильтруют через асбестовую пластинку ФС фильтра Зейтца.

Специфическую сыворотку получают пятикратной внутривенной иммунизацией кроликов.

 

Через две недели после последней инъекции у кроликов берут кровь, которую тотчас же ставят на 30 мин.— 1 час в термостат при 37". Образовавшийся кровяной сгусток отделяют от стенок пробирки стерильной стеклянной палочкой, после чего оставляют на 18—20 час. при +4°. Отстоявшуюся сыворотку сливают в другую стерильную пробирку и консервируют мертиолатом (1:1000).

 

Готовую сыворотку хранят до употребления при -20°.

Истощение антисыворотки от присутствия антител, специфичных к нормальным компонентам пчелы, проводят, иммунизируя кролика антигеном из здоровых пчел (см. приготовление антигена). Иммунизируют по выше описанной схеме. Таким образом, получают антисыворотку к нормальным тканям пчелы. Эту антисыворотку используют для осаждения всех нормальных антигенов пчелы из суспензии, содержащей вирус. Подвергнутую указанной обработке суспензию применяют при получении антисыворотки, специфичной к вирусам, следуя приведенной схеме.

Для выявления антигена используют меченную изотиоцианатом флуоресцеина сыворотку против глобулинов кролика, изготовляемую в Институте эпидемиологии и микробиологии им. Н. Ф. Гамалеи.

Процесс мечения препаратов состоит из следующих этапов. Срезы депарафинируют, покрывают немеченой иммунной сывороткой в разведении 1:10 и оставляют на контакте в течение 20 мин. при 37°, затем тщательно промывают водопроводной водой и метят флуоресцирующей сывороткой.

Для устранения неспецифического свечения срезов основной раствор сыворотки перед применением обрабатывают порошком, приготовленным из здоровых пчел. Для этого 20—30 г заведомо здоровых, наркотизированных эфиром пчел гомогенезируют в равном объеме раствора хлористого натрия 15 М, смешивают с четырьмя объемами ацетона и затем взбалтывают.

 

Надосадочную жидкость отсасывают, а осадок, применяя повторное центрифугирование, отмывают солевым раствором до тех пор, пока жидкость не станет бесцветной. Осадок повторно взвешивают в равном объеме солевого раствора, добавляют четыре объема ацетона, взбалтывают, удаляют надосадочную жидкость и снова добавляют четыре объема ацетона. Фильтруют через фильтр Бухнера. Остаток промывают небольшим количеством ацетона и высушивают в продолжение 12 час. при 37е. Высушенный материал сохраняют в закрытых флаконах в холодильнике (4°). Контроль — препараты, при обработке которых иммунная сыворотка заменена нормальной.

Просмотр препаратов и микрофотосъемку проводят на микроскопе МЛ-2 в падающих сине-фиолетовых лучах с объективом водной иммерсии. Требуемый спектр лучей выделяют фильтром ВС-8-2, СЗС-14-4 и ФС-1-4. Запирающий фильтр Т-2-Н; апертура 1,25; окуляр 10; сила тока при микроскопии — 4,5 А.

Специфическое свечение в клетках кишечного эпителия обнаруживается уже через 24 час. после заражения. Свечение наблюдается в виде небольших отдельных участков.

На следующие сутки люминесцирующие зоны дисперсно распространяются на большую часть цитоплазмы. В препаратах, приготовленных из пчел, проживших три-четыре дня после заражения, наблюдается очень яркая люминесценция околоядерных участков цитоплазмы зелено-желтым цветом, которая довольно четко контрастирует с более темным ядром. В базальной части отдельных эпителиальных клеток на вторые сутки после заражения обнаруживают люминесцирующие зерна размером от 1 до 3 мкм. Позже они выявляются в большинстве эпителиальных клеток тонкого отдела кишечника. В контроле отмечается слабая первичная люминесценция тканей заднего кишечника.

Патогене*. Тистологические препараты, приготовленные из кишечника больных вирусным параличом пчел, дали возможность установить, что в процессе развития инфекции ь цилиндрических и бокаловидных клетках тонкой кишки формируются оптически плотные полиморфные включения. Они округлой фЪрмы и локализованы преимущественно в околоядерной области цитоплазмы. Диаметр "X колеблется в пределах 0,5—2 мкм.

Включения начинали обнаруживать в цитоплазме уже на третий день после экспериментального заражения пчел возбудителем вирусного паралича. С течением времени число их возрастало, достигая максимума к периоду острого проявления болезни .

Включения образовывались одиночно или группами во многих участках цитоплазмы. Наибольшее скопление их фиксировали в базальной части клеток эпителия тонкой кишки. На различных этапах инфекционного процесса клетки сохраняли морфологическую целостность. Регенерационные центры, располагающиеся на дне складок кишечного эпителия, как правило, содержали особенно большое число включений, в то время как вершинные клетки нередко были свободны от них. Ни в одном случае мы не отмечали специфического нарушения целостности щеточной каемки (рабдориума) эпителия и выхода телец за пределы клетки

Помимо телец Морисона, в эпителиальных клетках заднего кишечника пчел, экспериментально зараженных вирусом паралича, на третьи-четвертые сутки выявляли обширные зоны темного пигмента. Первоначально пигмент обнаруживали в виде изолированных аморфных зерен величиной 0,5— 1 мкм в цитоплазме клеток и в межклеточных пространствах.

 

В процессе развития заболевания пигментированные зоны увеличивались, занимая обширные участки, локализованные, как правило, в апикальных частях эпителиальных клеток. На отдельных препаратах пигментированные образования полностью заполняли клетки эпителиальных тканей. В некоторых случаях включения пигмента достигали 10 и более микрон и локализовались не только в цитоплазме эпителиальных клеток, но и в просвете тонкого кишечника.

Включения Морисона, а также обнаруженный пигмент не окрашивались примулином. Однако крупные зерна пигмента четко выявлялись в флуо-рохромиров иных препаратах в виде контрастных темных пятен на фоне интенсивно люминесцирующей кишечной ткани.

У насекомых — хронических носителей микробных агентов — широко распространено и считается обычным меланиновое перерождение отмирающих клеток и тканей. Картина пигментации, описанная выше; дала основание для предположения, что обнаруженные образования связаны с меланином.

 

Для подтверждения этого нами были проведены качественные гистохимические реакции Препараты, содержащие исследуемый пигмент в больших количествах, обрабатывали 30%-ным раствором перекиси водорода и просматривали под микроскопом (Э. Пирс, 1962). Как показали наблюдения, включения при длительном воздействии перекиси теряли окраску и в некоторых случаях полностью обесцвечивались, что подтвердило их меланиновую природу.

Цитоморфологические исследования среднего кишечника пчел, экспериментально зараженных вирусом паралича, не показали отклонений от нормы

При просмотре препаратов, приготовленных из различных отделов кишечника пчел, зараженных вирусом паралича и меченных флуоресцирующей сывороткой, специфическое свечение наблюдалось в околоядерных зонах цитоплазмы клеток тонкого кишечника. В меченых срезах, содержащих меланин, свечение локализовалось в местах обычного расположения включений Морисона.

 

М. Брагаглия, 1967) аналогичные включения отмечали и у особей пчелиных семей, не проявляющих признаков заболевания. Наши исследования показывают, что такие включения формируются лишь в семьях, пораженных вирусом паралича. Этот факт, а также данные иммунофлюоресценции указывают на вирусную природу включений Мори-сона.

Эпизоотология. Первоисточником болезни служит пораженная вирусом паралича пчелиная семья. Внутри пчелиной семьи распространение вируса происходит при кормовых контактах больных особей со здоровыми.

Отлов трутней на пасеках, не благополучных по вирусному параличу пчел, и лабораторные исследования показали присутствие в них вируса паралича. Еще до возникновения у рабочих пчел четких клинических признаков вирусного паралича, обычно наблюдаемых в начале мая, часто отмечалось появление на пасеках большого числа «трясущихся», парализованных и в состоянии парезов трутней.

Ясно, что трутни (как биологически необходимые члены семьи), не оказываются в какой-то изоляции от инфекции, а наоборот, являются одним из наиболее важных звеньев распространения вирусного паралича от больных семей к здоровым, а также за пределы зараженной пасеки. Достаточно широко известно, что трутни летают обычно на расстояние до 5 км от улья, а в отдельных случаях—до 16 км. К этому можно добавить, что трутни, как правило, не спариваются с матками своей семьи и даже пасеки (Г. Ф. Таранов, 1958).

Кроме внутриульевых и лётных пчел, маток и трутней, заболевание внутри пасеки может распространять пчеловод через инфицированную тару и пчеловодный инвентарь. На соседние пасеки инфекцию заносят пчелиные рои, ее распространению способствуют также грубые нарушения вете-ринарно-санитарных правил при селекционной работе.

Наши исследования показали, что в больной пчелиной семье вирус паралича сохраняется весь год.

На не благополучных по вирусному параличу пасеках внешне здоровые пчелиные семьи могут быть носителями инфекции в латентных формах. Рост таких семей сокращается, они теряют продуктивность, а также способность к опылению медоносной флоры.

Распространение скрытой инфекции вируса представляет серьезнейшее препятствие при селекции пчел.

Профилактика. Для профилактики вирусного паралича пчел нами предложена обработка пораженных пчелиных семей аэрозолем панкреатической рибонуклеазы.

Обработки проводят раствором панкреатической рибонуклеазы (50 мл препарата на 15 мл воды) с конца апреля до двадцатого июня, каждые десять дней. Сидящих в сотовых рамках пчел обрабатывают в вечернее время мелкодисперсным аэрозолем фермента.

Аэрозоль панкреатической рибонуклеазы препятствует размножению вируса в организме пчел, тем самым предохраняя их от гибели.

В. И. ПОЛТЕВ. П. Л. ТАЛПАЛАЦКМЙ

С момента выявления у пчел включений Морисона (Морисон, 1936) и до настоящего времени отдельные авторы К. Хотмар, 1940; М. Вичи,

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *