ПАТОГЕННОСТЬ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ГНИЛЬЦОВ ПЧЕЛ

ПАТОГЕННОСТЬ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ГНИЛЬЦОВ ПЧЕЛ

А. М. СМИРНОВ, кандидат ветеринарных наук

Мы изучали патогенность возбудителей гнильцовых болезней пчел Вас. larvae, Str. pluton, Вас. älvei. Вас. orpheus, Str. apis, Вас. paraalvei для куриных эмбрионов.

ПАТОГЕННОСТЬ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ГНИЛЬЦОВ ПЧЕЛ

А. М. СМИРНОВ, кандидат ветеринарных наук

Мы изучали патогенность возбудителей гнильцовых болезней пчел Вас. larvae, Str. pluton, Вас. älvei. Вас. orpheus, Str. apis, Вас. paraalvei для куриных эмбрионов. В опытах были использованы восьми-девятидневные куриные эмбрионы, для заражения которых применяли штаммы культур Вас. larvae № 10, выращенных на кровяном агаре Цейслера или среде Тошкова (яичный агар с добавлением экстракта эритроцитов барана); Str. pluton Бейли № 126 и 110, выращенных на среде Бейли или среде Черепова; Вас. alvei № 244, Вас. orpheus № 224 и Str. apis № 1. выращенных на обычном мясо-пептонном агаре, а также Вас. paraalvei Лг 214. выращенной на среде Тошкова.

 

Вегетативные формы бацилл получали, смывая физиологическим раствором односуточную культуру с агара, а споры — 10—12-суточную. Морфологические и культурально-биохнмические свойства указанных штаммов культур были типичными.

 

Кроме того, для заражения эмбрионов использовали полученный с пасек нативный патологический материал — личинки пчел, погибшие от американского и европейского гнильцов. Предварительно эти личинки растирали в ступке, разбавляя стерильным физиологическим раствором. При микроскопии мазков из свежих растертых личинок, погибших от американского гнильца, обнаруживали вегетативные формы Вас. larvae и единичные споры, а в более поздних случаях, когда личинки высыхали до состояния корочек,—одни споры.

 

Для заражения споры отмывали от тканей личинки по методу В. А. Триленко. При микроскопии мазков из растертых личинок, погибших в результате заболевания европейским гнильцом, всегда обнаруживали разнообразную микрофлору — палочки, споры, напоминающие по морфологии Вас. alvei, и кокки — Str. pluton. Str. apis.

Куриные эмбрионы заражали в хорио-налаитоисную полость по методике В. Д. Штнбен и Л. Трофимовой (1963), применяя дозы по 20, 200 и 400 млн. микробных тел на один эмбрион. Опыты сопровождали контролем, для чего вводили в эмбрион 0,01; 0,02 и 0,1 мл стерильного физиологического раствора.

 

Эмбрионы инкубировали в термостате при 38°. Жизнеспособность эмбрионов определяли через 24 и 48 час., в последующем, если эмбрионы не погибали,— через каждые сутки. После гибели эмбрионов яйца вскрывали, отмечали состояние зародыша и делали мазки из разных органов эмбриона — печени, селезенки, почек, легкого, головного мозга — с дальнейшей окраской по Граму и карболовым фуксином. Опыты проводили в трехкратной повторности.

Вегетативная форма Вас. larvae при 20, 200 и 400 млн. микробных тел на один эмбрион ие вызывала их гибели даже через 14 дней после заражения, в то время как споры при дозе 20 млн. на эмбрион вызывали гибель всех эмбрионов через семь дней, при 200 млн. — через 96 час. и при 400 млн. — через 24 час.

Вегетативная форма Вас. paraalvei при 20 и 200 мли. микробных тел на один эмбрион вызывала гибель эмбрионов через семь дней, а при 400 млн.— через 24 час. Под воздействием спор этого микроба гибель эмбрионов наступала соответственно через 48 и 24 час

Вегетативная и споровая формы Вас. orpheus вызывали гибель всех эмбрионов при 20, 200 н 400 млн. микробных тел на один эмбрнон через 24 час., а вегетативная форма Вас. alvei при 20 млн. микробных тел —через 96 час., 200 млн. —через 48 час. и 400 млн.— через 24 час., споры соответственно — через 48. 24 и 24 час.

Под воздействием Str. pluton Бейли при 20 и 200 млн. микробных тел гибель иных эмбрионов наступала через час., 400 млн. — через 24 час Str. apis вызывал гибель эмбрионов соответственно через 96 и 24 час.

Заражение по 0.01: 0,02 и 0,1 мл на 1 эмбрион растертыми корочками личинок, погибших от европейского гннльца (две личинки на 1 мл физиологического раствора), влекло за собой гибель эмбрионов через 96 час,- Контрольные эмбрионы за отмеченный промежуток времени —14 дней — не погибали.

Из различных тканей, погибших от заражения эмбрионов, выделяли исходные штаммы возбудителей.

Таким образом, возбудители гнпльцовых болезней вызывают заражение восьми-девятндпевных куриных эмбрионов.

Экспериментальные данные о патогенности возбудителя америкосовского гнильца пчел для теплокровных животных в доступной нам литературе отсутствовали так же. как и сведения о патогенности для теплокровных животных при оральном заражении инфицированным медом.

Не было данных и о патогениости названных микробов для организма человека. Проведение таких экспериментов на людях вряд ли безразлично для организма человека и поэтому не может считаться приемлемым. В связи с этим для определения патогенности названных возбудителей применяется биологический метод, основанный на воспроизведении заболевания на лабораторных животных.

Вопрос о патогенности возбудителей болезней пчел для теплокровных животных и других биологических организмов, помимо насекомых, имеет не только научное, но и практическое значение.

В связи с вышеизложенным мы поставили перед собой задачу изучить пато-генность возбудителей американского (Вас. larvae) и европейского (Вас. ajvei и Str. apis) гнильцов для белых мышей, морских свинок и кроликов.

Для опытов использовали по два штамма возбудителей — Вас. alvei — № 7 и 20. Str. apis — 12 и 14, Вас. larvae —№ 10. 1040/75, а также мед с не благополучных по американскому н европейскому гнильцу пасек, из которого выделили жизнеспособные споры Вас. larvae и Вас. alvei. Кроме того, для заражения меда брали растертый корочковый материал трупов личинок, умерших от гнильцовых болезией.

При пероральном способе заражения вводили натощак свежую бульонную культуру Вас. larvae, Вас. alvei, Str. apis 18—24-часового роста по 1 мл белым мышам, по 10 мл морским евннкам, по 20 мл — кроликам ежедневно в течение десяти дней. Таким же образом были введены 2 млрд. взвеси спор Вас. larvae. Вас. alvei. я также 2 млрд. взвеси вегетативных форм Вас. larvae. Вас. alvei и 2 млрд. взвеси Str. apis.

Было применено также скармливание белым мышам, морским свиикам н кроликам меда, искусственно инфицированного возбудителями Вас. larvae. Вас. alvei, Str. apis при плотности инфицирования 2 млрд. микробных тел в 1 г меда. Параллельно скармливали мед. взятый от больных гнильцами пчелиных семей. Длительность опыта —30 дней. Ежедневно одной мыши скармливали по 1 г меда, одной морской свинке — 2,5 г н одному кролику —от 5 до 20 г меда.

Изучали способ внутрибрюшипного заражения белых мышей. Предварительно одной группе внутримышечно вводили по 0,2 мл гидрокортизона для подавления естественной иммунобиологической резистентности организма. Другую группу мышей заражали внутрибрюшннно без введения гидрокортизона. Заражение осуществляли, вводя внутрибрюшии-но по 0.5 мл 2 млрд. взвеси вегетативных клеток и спор Вас. larvae. Вас. alvei, а также Str. apis.

При подкожном заражении белых мышей вводили по 0.5 мл 2 млрд. взвеси Вас. larvae. Вас. alvei, Str. apis. Все опыты сопровождались контролем. В контроле (вода) было 25 мышей, пять морских свинок и три кролика. При гибели одной мыши, находившейся в контроле. возбудителей гнильцов ие выделено. Знак «0»  обозначает, что опыты не проводили, тире — падежа животных не было

Гибель двух белых мышей произошла в результате скармливания 2 млрд. взвеси спор Вас. alvei. трех мышей — от свежей бульонной культуры II 2 млрд. взвеси Str. apis. Этн культуры выделены из желудка и печени животных. При последующих пассажах выделенных культур Вас. alvei и Str. apis через белых мышей их гибели не отмечали. Другие способы заражения — подкожное, внутри-брюшинное введение, а также скармливание инфицированного меда — не вызывали гибели белых мышей.

Всесоюзный научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, Москва

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *