Диагностика браулеза

для диагностики браулеза

Е. С. БЛИН, Н. М. СТОЛБОВ

для диагностики браулеза

Е. С. БЛИН, Н. М. СТОЛБОВ

Для диагностики заболеваний пчел немаловажное значение имеет качественный и количественный анализ воско-медовой смеси. Он дает возможность выделить механические примеси и минеральные остатки, а также отделить различных членистоногих, среди которых могут быть вредители или паразиты пчел. Так, например, личинки браул - возбудители браулеза медоносной пчелы — обитают в крышечках медовых сотов, выстраивай ходы с их внутренней стороны. В расширенной конечной части ходов личинки старших возрастов, закончив питание, окукливаются (3, Эреши-Пал, 1963; И. Дуков, 1965; Н. С. Куликов, 1966; А. А. Мар-косян, Л. А. Туманян, Ж, К. Маркосян, 1973, и др.). В связи с этим становится актуальной разработка методов растворения воско-медовой смеси.

Воско-медовая смесь состоит из большого количества разнообразных органических и минеральных веществ. В ней много моносахаров, особенно глюкозы и фруктозы, меньше дисахаров, витаминов, белков, карбоновых кислот и аминокислот, а также минеральных веществ. Восковая часть смеси в отличие от гидрофильного меда является гидрофобной. Она представлена сложными эфирами одноатомных спиртов и жирных кислот, свободными жирными кислотами и спиртами, парафинами и разнообразными примесями. Таким образом, отношение к растворителям у компонентов воско-медовой смеси неодинаковое: одна часть компонентов растворима в полярных растворителях, другая — в неполярных. Поэтому растворитель или смесь растворителей, а также методика растворения могут быть отработаны только экспериментально.

В качестве объекта исследования мы избрали воско-медовую смесь, содержащую 21,7 масс % меда, остальное составлял воск с примесями. Высокое содержание воска усложняет разрешаемую задачу, и поэтому такая смесь является удобным объектом для разработки методики растворения аналогичных смесей. Воск растворим в петролейном эфире, бензоле, сероуглероде, ксилоле и че-тыреххлористом углероде (В. Г, Чудаков, 1979, и др.), но рекомендации по растворению смеси «воск — мед» отсутствуют.

Нами изучена растворяемость смеси воска с медом в 18 растворителях с целью изыскания среди них такого, который был бы способен растворить все компоненты смеси, кроме членистоногих — вредителей пчел и твердых частиц различного происхождения.

В зависимости от характера растворителя происходило избирательное растворение меда или воска. Нерастворимый остаток находился во взвешенном состоянии или в виде вязкой массы, прилипавшей ко дну и стенкам колбы.

Проведенные исследования не позволили обнаружить вещество, одинаково успешно растворяющее мед и воск. Вследствие этого возникла необходимость разработки методики ступенчатого растворения их смеси. По этому способу навеску воско-медовой смеси заливали водой в отношении 1:10—15 и тщательно перемешивали. Для обеспечения полноты растворения меда массу подогревали до 60 °С.

 

Нерастворившийся в воде воск всплывал. Его снимали шпателем. Для исключения потерь нерастворимых мелких частиц раствор меда фильтровали. Весь воск собирали вместе и добавляли к нему воду в отношении 1:5. Перемешивали, нагревали до 50 °С, отделяли воск, как указано выше, раскладывая тонким слоем на стекле и высушивая в струе воздуха, создаваемой вентилятором.

Выделенный сухой воск (1 г) помещали в коническую колбу на 100 мл, заливали 20 г растворителя, закрывали притертой пробкой и встряхивали. Затем нагревали до ВО °С. Фильтровали через быстрофильтрующий бумажный фильтр (с черной лентой). Остаток на фильтре промывали диэтиловым эфиром. На нем оставались пыльца, механические загрязнения (например, пыль) и членистоногие. В частности, при растворении эабруса, обогащенного медом, на фильтр выпадали личинки браул. Фильтр помещали на стекло, остаток сушили при комнатной температуре и отбирали членистоногих — паразитов медоносной пчелы — для установления их видовой принадлежности.

Для растворения воска описанным методом наиболее пригодны ксилол, смесь цсилола с диметилформамидом, дихлорэтан, ундециловый спирт, тетрагидрофуран (табл.).

При использовании тетрагидрофурана, диметилсульфоксида, дихлорэтана и ундецилового спирта мы применяли горячее фильрование, так как при охлаждении воск быстро выпадал в осадок, что препятствует фильтрованию.

Интенсивное возрастание растворимости воска наблюдалось при увеличении уровня содержания ксилола от 5 до 20 г (рис. 1).

В результате изучения растворимости воска в ксилоле в зависимости от температуры выявлено, что для обеспечения полноты растворения достаточно 80 °С (рис. 2).

Разработанная нами ступенчатая методика растворения смеси воск — мед высокоэффективна, но требует достаточно больших затрат времени, которые могут быть значительно сокращены при использовании методики растворения воско-медовой смеси в двухфазной системе. В качестве растворителя взята система вода — ксилол. Были апробированы три способа:

1. К 1 г смеси воска с медом добавляли 50 г дистиллированной воды и 50 г ксилола; 2. К 2 г смеси добавляли 100 г воды и 50 г ксилола; 3. К 2 г смеси добавляли 100 г воды и 25 г ксилола.

Образовывались двухфазные системы, в которых в нижнем слое была вода, а в верхнем — ксилол. Для обеспечения полноты растворения смесь нагревали до 75—80 °С. Активно перемешивать ее не следует, так как при этом образуется стойкая эмульсия значительно затрудняющая фильтрование. В первой серии опытов фильтрование длилось 2 ч 10 мин, во втором — I ч 30 мин, в третьем — 1 ч 10 мин. Продолжительность фильтрования, по-видимому, можно объяснить тем, что вначале фильтруется водный раствор меда. При этом происходит гидрофилизация фильтра. Через Гидрофилизированный фильтр плохо фильтруется раствор воска в ксилоле, обладающий гидрофобными свойствами.

С целью ускорения фильтрации использовали фильтрование под вакуумом с применением водоструйного насоса.

Извлеченные личинки браул могут быть идентифицированы при сравнении с личинками возбудителей браулеза из эталонных энтомологических коллекций. Это может служить основой для диагностирования инвазии наряду с общепринятым (В, И. Полтев, Е.В. Нешатаева, 1977) методом выявлением взрослых браул на теле пчел.

Таким образом, разработана методика ступенчатого растворения воско-медовой смеси и методика ее растворения в двухфазной системе. Для практического применения следует отдать предпочтение методике растворения в двухфазной системе с фильтрованием под вакуумом, так как она требует меньше времени.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *