МИКОЗЫ ПЧЕЛ-ЛИСТОРЕЗОВ

Среди опылителей люцерны, контактирующих с медоносными пчелами, основное место занимают пчелы-листорезы. Успешное промышленное разведение и использование их для опыления люцерны в семеноводческих хозяйствах невозможны без профилактики болезней, без строгого соблюдения правил содержания и других необходимых требований.

Среди опылителей люцерны, контактирующих с медоносными пчелами, основное место занимают пчелы-листорезы. Успешное промышленное разведение и использование их для опыления люцерны в семеноводческих хозяйствах невозможны без профилактики болезней, без строгого соблюдения правил содержания и других необходимых требований.

Большой урон хозяйствам могут наносить микотические болезни, вызывающие гибель доимагинальных стадий пчел-листорезов Многие вопросы, касающиеся отдельной и общей патологии мегахил и медоносных пчел, в частности микозы, еще недостаточно изучены. В связи с эучм мы исследовали некоторые вопросы эпизоотологии, диагностики и профилактики микотических болезней пчел-листорезов.

Среди многих инфекционных заболеваний пчел-листорезов микозы представляют особую группу болезней, вызываемых патоген-» ными и условно-патогенными грибами.

Грибы широко распространены в природе, часто обнаруживаются в почве, воде, в нектаре и пыльце растений, на пчелах, пчеловодном инвентаре и других объектах (патогенные грибы — в виде спор, сапрофитные — в виде спор и мицелия).

 

Однако известно лишь незначительное число грибов с выраженной специфической способностью вызывать заболевание у пчел-листорезов К ним относятся гриб Ascosphaera aggregata — возбудитель аскосфероза пчел-листорезов Megachile го-tundata и гриб Ascosphaera proliperda, вызывающий поражение пчел-листорезов Megachile centuncularis. Исследователи первоначально относили эти грибы к виду Ascosphaera apis.

 

В дальнейшем с помощью сканирующего микроскопа были получены данные по морфологической характеристике стенки цист грибов A. aggregata и A. proliperda, позволяющие их дифференцировать от других видов рода Ascosphaera. Однако вопрос о перекрестной патогенности грибов A. aggregata и A proliperda для пчел-листорезов и медоносных пчел остается неизученным.

Из условно-патогенных возбудителей, вызывающих так называемые плесневые микозы только в особых случаях, наиболее часто встречаются сапрофитные грибы из родов Pénicillium, Rhizopus, Mucor, Fusarium.

Заболевание пчел-листорезов чаще возникает при нарушении условий содержания, сопровождающихся повышенной влажностью внешней среды, при длительной неблагоприятной погоде, недостатке кормовых ресурсов, несоблюдении сроков применения пестицидов и других условиях, способствующих ослаблению организма насекомых

Заболевание пчел-листорезов аскосферозом впервые было зарегистрировано в США (1971 г). Наиболее ощутимый ущерб отмечался в 1974 г., когда болезнь распространилась во многих штатах и гибель насекомых достигла 40 %.

В настоящее время аскосфероз пчел-листорезов распространен в мегахиловодческих хозяйствах и приносит им огромные убытки

Возбудитель заболевания вызывает поражение личинок и предкуколок пчел. Заражение происходит при потреблении личинками инфицированного корма, и через покровы тела при их контаминации со стороны инфицированных листьев кокона, канала пластин, формирующих улей, и через взрослых насекомых, когда они проходят через коконы с зараженными личинками при выходе. В последнем случае пчелы несут на поверхности тела от 100 до 300 млн спор, которые распространяются во внешней среде при постройке гнезда, фуражировании и спаривании насекомых При этом спорами загрязняются гнездовой материал, поверхность почвы вокруг ульев и другие объекты, в которых они могут длительное время сохраняться.

Мицелий гриба, прорастающий в кишечнике или на поверхности кутикулы, проникает в тело личинки и вызывает ее гибель В начале заболевания она увеличивается в объеме, теряет сегментацию, блеск, окраска тела изменяется от белой до желтоватой, желто-коричневатой. Консистенция пораженных личинок вначале сыроподобная, затем плотная, легко крошащаяся. На поверхности личинок появляется серо-белый войлокообраз-ный налет мицелия Вследствие образования спороцист гриба цвет ее тела становится черно-серым (черно-пепельным).

При микологическом исследовании проб коконов пчел-листорезов, поступивших для анализа в ВИЭВ из различных мегахиловодческих хозяйств России в 1989—1990 гг., нами было выделено 27 культур грибов Из них идентифицированы до рода 15 культур, до вида — 12. Возбудитель аскосфероза был выделен в двух хозяйствах. В них же обнаружили грибы, обусловившие плесневые микозы личинок пчел-листорезов, В восьми хозяйствах выделили только возбудителей плесневых микозов.

 

Наиболее часто из пораженных грибами личинок выделяли Aspergillus niger, Torula sp., Mucor sp. Rizopus sp., затем Aspergillus nidulans, A. flavus, A. fumigatus, Pénicillium sp. При этом поражение личинок обусловливалось в большинстве случаев ассоциацией грибов (67 % ), реже — одним видом гриба (33 %). Погибшие личинки имели твердую консистенцию. В зависимости от вида гриба, вызвавшего поражение, их цвет становился черным (Aspergillus niger), желтовато-зеленоватым (A. flavus, A. nidulans), серо-зеленоватым (A. fumigatus), голубовато-зеленым (Pénicillium sp.), серо-бурым (Mucor sp.f Rhizopus sp.), коричнево-зеленоватым (Forula sp.).

Диагноз на аскосфероз и плесневые микозы ставят на основании характерных внешних признаков поражения личинок и результатов лабораторного исследования. В результате апробирования различных способов диагностики микозов были отработаны методики выделения, культивирования и определения патогенных и условно-патогенных грибов, опасных для пчел-листорезов

При подозрении на грибные болезни в лабораторию направляют пробы коконов около 50 экземпляров, из которых не вышли пчелы после пробной инкубации или вывоза пасеки в поле. Материалом для исследования могут быть средние пробы коконов, не менее 40 г (около 350 экземпляров) от каждой партии, контейнера (весом 22—23 кг) с их последующей инкубацией в лаборатории. Пробы коконов упаковывают в бумажные пакеты, снабженные этикеткой с указанием адреса хозяйства, номера улья (контейнера для хранения), даты взятия материала, характера изменений, обнаруженных при вскрытии коконов, а также цели исследований.

Лабораторная диагностика микозов пчел-листорезов заключается в визуальном осмотре и микроскопии материала, выделении чистых культур и их определении.

При поступлении проб коконов без предварительной инкубации их инкубируют в течение 30 дней при температуре 29—30 °С и относительной влажности воздуха 70—80 %.

Коконы с нежизнеспособными личинками вскрывают, срезая острым лезвием бритвы или скальпеля верхушки каждого кокона, и извлекают погибшие личинки Помещают их в чашку Петри и осматривают. При этом определяют число коконов с погибшими личинками, которые имеют признаки грибного поражения, подсчитывают степень поражения (%). Поражение грибом может быть обнаружено на внутренней поверхности коконов после их разреза.

Проведенные нами исследования показали, что успешному обнаружению пораженных грибами личинок пчел-листорезов способствуют тщательный отбор средних проб коконов для анализа и их предварительное инкубирование перед исследованием в лаборатории. При этом наличие плесени на поверхности коконов не всегда указывает на поражение личинок микозами.

Для микроскопического исследования с поверхности пораженных личинок делают соскоб налета мицелия и спор грибов, помещают его на предметное стекло и наносят каплю 50 % водного раствора глицерина или каплю лактофенола. Исследование проводят при малом и среднем увеличении микроскопа. В случае поражения личинок аскосферозом под микроскопом обнаруживают разветвленные гифы многоклеточного мицелия, характерные цисты, содержащие споровые шары, которые заполнены спорами, а при плесневых микозах — одно- или многоклеточный мицелий, спорангиеносцы и спорангии, конидиеносцы, конидиальные головки и споры. Обнаружение грибных элементов в материале дает основание поставить предварительный диагноз на аскосфероз и плесневые микозы.

При микологическом исследовании для получения чистой культуры грибов делают посев их материала на одну из питательных сред сусло-агар, агар Сабуро с 0,5 % дрожжевого экстракта, 2 % солодовый агар, картофельно-декстрозный агар, а также агар Чапека. Перед посевом его расплавляют в водяной бане и после охлаждения до 40—50 °С добавляют антибиотики (пенициллина — 50 ЕД и стрептомицина— 100 ЕД на 1 мл среды) для подавления сопутствующей бактериальной флоры.

Возбудителя болезни выделяют методами прямого посева и разведения При прямом посеве пораженные личинки, помещенные в стерильную чашку Петри, расщепляют препаровальной иглой. Затем частицы не более 1 мм помещают при помощи бактериологической петли в чашки Петри с питательной средой в три — пять точек. Посевы выдерживают при 26—30 °С в термостате и наблюдают за ними в течение 10 дней, имея в виду, что при аскосферозе на 3—5-й день на поверхности среды (кроме агара Чапека, на котором гриб не растет) появляются характерные серо-белые войлокообразные колонии, в дальнейшем вследствие образования плодовых тел приобретающие вид серого (серо-черного) налета Плодовые тела (спороцисты, споровые шары, споры) гриба Ascosphaera aggregate образуются, как правило, только на сусло-агаре, на остальных средах развитие гриба происходит до стадии вегетативного мицелия.

 

Последнее характеризует более высокую требовательность гриба по сравнению с Ascosphaera apis к питательности сред, используемых для его культивирования. В случае плесневых ми- я козов через 3—4 дня на агаре Чапека и через 2—3 дня на других средах появляются характерные зрелые колонии грибов: родов Aspergillus — черно-коричневые (A niger), желтовато-зеленые (A. flavus, A. nidulans), серо-зеленые (A. fumigatus); Penicillium — голубовато-зеленые, Mucor, Rhizopus — серо-бурые; Forula — зеленовато коричневые. Типичные колонии отсевают на скошенный агар в пробирках для получения чистых культур грибов.

 

Небольшие кусочки питательной среды с элементами гриба исследуют под микроскопом. При аскосферозе обнаруживают септированный мицелий, состоящий из ветвистых гиф, споровые шары (10—25 мкм), которые заключены в шаровидные цисты (30—120 мкм), споры (1,5— 2,5- 4,5—6 мкм, эллиптические, гладкие, бесцветные) При микроскопии колоний грибов рода Aspergillus обнаруживают многоклеточный мицелий с многочисленными конидие-носцами, на концах которых имеются булаво-. видные (шаровидные) утолщения (конидиальные головки), несущие радиально расположенные двухъярусные стеригмы с черно-коричневыми конидиями (2—3 мкм),— A niger; одноярусные или двухъярусные стеригмы с цепочками желтоватых округлых конидий диаметром 3—6 мкм — А. Науи5 (А тс1и1ап5 — двухъярусные стеригмы с клейстокарпиями); одноярусные стеригмы с серо-зелеными конидиями (2—3 мкм) — А. (ипидаФде. Исследуя культуры грибов РейсШит под микроскопом, обнаруживают характерно разветвленные ко-нидиеносцы в виде кисточки, несущие цепочки зеленоватых конидий (2—3 мкм в диаметре); Мисог, Яйгориз — несептированныи мицелий, слабо окрашенный в бурый или светлосерый цвет, спорангиеносцы, на концах которых расположены многоспоровые спорангии со столбиком (столоны и ризоиды отсутствуют у Мисог, У КИ|20ри5 имеются дугообразные столоны и ризоиды); Рогида — мицелий и конидии темноокрашенные, конидиеносцы слабо выраженные, часто целиком распадающиеся на конидии (2,5—14 мкм в диаметре).

Таким образом, диагноз на микозы пчел-листорезов устанавливают при наличии специфических поражений личинок и на основе положительных результатов микроскопического и микологического исследований. Срок исследований— до 10 дней (до 1,5 мес с инкубацией коконов в лаборатории)

До настоящего времени средства лечения микозов пчел-листорезов не разработаны, отмечена высокая токсичность для насекомых аскоцидина, бениата, ДФНД, энилконазола, роврола.

В целях предупреждения возникновения грибных болезней пчел-листорезов следует строго выполнять правила содержания этих насекомых, изложенные в Рекомендациях по их разведению и использованию (Госагро-пром РСФСР, 1987) и Рекомендациях по борьбе с болезнями и вредителями пчел-листорезов (МСХ СССР, 1984). Особенно тщательно необходимо следить за вентиляцией и другими факторами, влияющими на микроклимат внутри укрытий для ульев в поле (защита от дождя, наличие отверстий для проветривания), в контейнерах при хранении коконов (температура 4—5 °С, относительная влажность 50 %), при инкубации коконов (температура 29—30 °С, относительная влажность 70 %), при дозревании коконов (температура 14—20 °С, относительная влажность 70%), не допуская сырости и плесневения стен помещений, контейнеров, ульев, инвентаря. Кроме того, необходимо строго соблюдать оптимальные сроки применения химических средств защиты растений.

Основные профилактические меры в хозяйствах — охрана пчел от заноса возбудителей, постоянный контроль за состоянием коконов (вскрытие оставшихся коконов после пробной инкубации) и взрослых пчел-листорезов, а также регулярные санитарно-профи-лактические обработки инвентаря, оборудования и помещений для содержания пчел. С этой целью систематически проводят следующие текущие дезинфекционные мероприятия. После окончания выплода пчел-листорезов в поле 10 % коконов с невь шедшими личинками вскрывают, оставшийся материал собирают с поддонов и сжигают Пригодные для дальнейшего использования пластины и поддоны

тщательно чистят, дезинфицируют: деревянные— выдерживают при 110—120°С в течение 4 ч; полистироловые — погружают на 2—3 мин в 2 % раствор гипохлорита натрия, затем после промывки в воде 2—3 дня просушивают на солнце. Продезинфицированные пластины складывают в чистые предварительно обеззараженные ящики с плотно прилегающими крышками. В помещениях для хранения коконов пчел-листорезов, инкубаторах, в комнатах для хранения инвентаря, вычесывания коконов не реже одного раза в неделю тщательно удаляют влажным способом пыль и мусор.

 

По окончании сезонных работ проводят их дезинфекцию — 2—3 % раствором едкого натрия или побелкой 20 % взвесью негашеной извести, затем помещения тщательно проветривают. Перед входом в каждое помещение устанавливают дезковрики — ящик с опилками или резиновые маты, увлажненные 1—2 % раствором едкого натрия. Площадки, на которых находятся укрытия, еженедельно тщательно очищают от трупов пчел, выброшенных коконов, которые собирают и сжигают После демонтирования укрытий площадки прожигают.

При установлении в хозяйствах аскосферо-за и плесневых микозов пчел-листорезов проводят специальные мероприятия. Пораженные партии коконов инкубируют отдельно от здоровых и в последнюю очередь. Для работы с этим материалом закрепляют отдельный персонал, спецодежду и инвентарь, предупреж дая тем самым нежелательный контакт. При работе соблюдают меры безопасности, закрывая органы дыхания марлевыми повязками.

При поражении более 0,5 % коконов в партии они не подлежат реализации в другие хозяйства. Вывоз таких пчел производят на отдельно закрепленные поля

Проведенные нами испытания дезинфицирующих средств выявили возможность использования 10 %-ного водного раствора перекиси водорода с добавлением 0,5—3 % муравьиной или уксусной кислоты для обеззараживания деревянных и полистироловых пластин из расчета 0,25 л на 1 м 8—10-кратным периодическим орошением (через 1—1,5 ч) или погружением их на 24 ч. После дезинфекции инвентарь (пластины, инкубационные поддоны, лотки) промывают водой и высушивают на воздухе.

Помещения для хранения коконов, инвентаря, инкубации, разборки ульев, вычесывания и просеивания коконов тщательно очищают от пыли и мусора, проводят влажную уборку и их дезинфекцию подогретым до 60 °С 5 %-ным раствором едкого натрия, при экспозиции не менее 6 ч, орошая через каждые 1—1,5 ч, используя по 0 25 л на 1 м После этого помещения промывают водой, просушивают и тщательно проветривают. Спецодежду кипятят 30 мин в 3 %-ном растворе кальцинированной соды, затем промывают в воде и сушат.

Контролируют качество дезинфекции сразу после ее проведения. С каждого вида инвентаря (1 % от числа обеззараженных объектов) берут по одной пробе смыва с участков размером 10ХЮ см. Предварительно готовят ватно-марлевые тампоны массой 0,25—3,0 г в колбе с 20—25 мл воды. Смонтированные колбы стерилизуют. При взятии смыва стерильным пинцетом берут тампон, отжимают, протирают им поверхность в течение 1—2 мин и помещают отдельно в колбу, откуда он был взят. Материал с сопроводительным письмом доставляют в лабораторию, пробы исследуют в день доставки.

 

Тампон тщательно отжимают и удаляют; жидкость помещают в стерильные центрифужные пробирки и центрифугируют 30 мин при 3—3,5 тыс. оборотах в минуту Надосадочную жидкость удаляют, к осадку приливают такое же количество воды и вновь центрифугируют в течение 20 мин при тех же оборотах, затем то же самое повторяют еще раз. После удаления надосадочной жидкости 0,5 мл осадка высевают на среды и культивируют, как указано ранее.

Площадки, на которых находились укрытия для ульев после их демонтирования, тщательно прожигают или обрабатывают хлорной известью (38 % активного хлора) из расчета 5 кг на 1 м2, перемешивая ее с почвой на глубину 5 см с последующим смачиванием водой (5 л на 1 м ). Экспозиция обеззараживания 10 суток

Своевременное проведение указанных диагностических исследований и профилактических мероприятий позволит снизить в мегахиловодческих хозяйствах ущерб, связанный с микозами. Для предупреждения распространения возбудителей заразных болезней и возможного перезаражения микозами медоносных пчел и пчел-листорезов перевозка последних с целью продажи разрешается из местности, благополучной по болезням медоносной пчелы (хроническому вирусному параличу, аспергиллезу и аскосферозу).

М. М. СЫЧЕВ

г. Москва

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *